RNA 1
RNA Extraktion

RNA 2
PAGE

RNA 3
RNA Elution

RNA 4
cDNA library

RNA 5
Klonierung

Master Studiengang Anthropologie - Modul 3 - Dr. David Rosenkranz
Elution von RNA Fraktionen aus einem Polyacrylamidgel
Abkürzunken: RT=Raumtemperatur, h=Stunden, min=Minuten, U=units


1.
Unter UV Licht (Schutzvisier tragen!) werden mit einem Skalpel die gewünschten RNA Fraktionen aus dem Gel geschnitten und in ein 2 ml Tube überführt. Mithilfe einer Pipettenspitze wird das Acrylamidgel im Tube zerkleinert. Anschließend werden 300 µl H₂O hinzupipettiert.

2.
5 µl RNase-Inhibitor (RiboLock, 40 U/µl) hinzugeben und 3 h bei 37 °C auf einem Schüttler eluieren lassen.

3.
Das Eluat wird zusammen mit den Gelfragmenten in eine Ultrafree-MC (Millipore) Säule (Porengröße der Filter: 0.45 µm) überführt und bei RT und 12000 g für 4 min zentrifugiert.

4.
Zur weiteren Aufreinigung wird die RNA-Lösung in eine Amicon Ultra-0.5 3K Säule überführt und mit H₂O auf 500 µl aufgefüllt. Bei RT und 14000 g für 45 min zentrifugieren, anschließend wird der Durchfluss verworfen und die Filtereinheit erneut mit H₂O auf 500 µl aufgefüllt. Bei RT und 14000 g für 45 min zentrifugieren. Filtereinheit umgekehrt in ein frisches Amicon Tube geben und bei RT und 1000 g 2 min zentrifugieren. Die RNA kann für 4 Wochen bei -20 °C gelagert werden. Längere Lagerzeiten bei -80 °C.



Zuletzt aktualisiert: 01.03.2018